Processus standard pour la réaction PCR

Le processus PCR standard est divisé en trois étapes:

Dénaturation de l'ADN: (90 ℃ -96 ℃): une matrice d'ADN double brin subit un clivage de liaison hydrogène sous action thermique, formant de l'ADN simple brin

Recuit: (60 ℃ -65 ℃): Lorsque la température du système diminue, l'amorce se lie à la matrice d'ADN, formant un double brin local.

Extension: (70 ℃ -75 ℃): Sous l'action de l'enzyme Taq (à environ 72 ℃, avec la meilleure activité), dNTP est utilisé comme matériau de départ, s'étendant de l'extrémité 3 'de l'amorce dans le sens de l'extrémité 5 '→ 3', pour synthétiser des brins d'ADN complémentaires à la matrice.

Après chaque cycle de dénaturation, de recuit et d'extension, la teneur en ADN double. De nos jours, certaines PCR peuvent se répliquer en peu de temps même si l'activité enzymatique Taq n'est pas optimale en raison de la courte région d'amplification. Par conséquent, une méthode en deux étapes peut être utilisée, qui implique le recuit et l'étirement simultanément entre 60 ℃ et 65 ℃, pour réduire une élévation de température et diminuer le processus et améliorer la vitesse de réaction.

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